树妖魅姬（麦家琪饰）当年电影《倩女幽魂》中刘兆铭扮演的千年树妖姥姥忽男忽女、狰狞可怕，让人过目难忘。这次编剧把“树妖姥姥”改成了一个年轻貌美的“树妖魅姬”，由刚刚在电影《偷窥无罪》中扮演璩美凤而名声大噪的麦家琪出演，相当出位，令人期待。魅姬是剧中惟一的反角，因此服装很多都是深色的，脸上还会涂很多白粉，剧中她为了增加魔力不择手段，“又坏又自私”
。麦家琪苦笑着告诉记者，其实《倩女幽魂》中她最喜欢的是小倩，没想到演了这么多“坏女人”，这次还是演一个“树妖”。燕赤霞（元华饰） 司马三娘（恬妞饰）在电影版中燕赤霞可以说是最出彩的角色之一，当年的演员午马还由此拿了金马奖。电视剧里燕赤霞由老演员元华扮演，他还多了个大大咧咧的老婆司马三娘，由同样是好戏之人的恬妞扮演。在电视版里，燕赤霞的戏加强了很多，不仅担负了“除妖降魔”的重任，最后还帮助宁采臣让小倩死而复生。司马三娘的性格则和“苗翠花”很相似。这对夫妻心地善良，爱打抱不平，但性格暴躁，一辈子吵吵闹闹，十足一对“活宝”。司马三娘(恬妞饰)在电影版中燕赤霞可以说是最出彩的角色之一，当年的演员午马还由此拿了 金马奖。电视剧里燕赤霞由老演员元华扮演，他还多了个大大咧咧的老婆司马三娘，由同样是好戏之人的恬妞扮演。在电视版 里，燕赤霞的戏加强了很多，不仅担负了“除妖降魔”的重任，最后还帮助宁采臣让小倩死而复生。司马三娘的性格则和“苗 翠花”很相似。这对夫妻心地善良，爱打抱不平，但性格暴躁，一辈子吵吵闹闹，十足一对“活宝”
宁采臣（陈晓东饰虽然很少演古装戏，但扮起书生装来，陈晓东与当年的张国荣颇有几分相似之处。明知道会被人拿来和张国荣进行对比，但陈晓东却表示“没有压力”，因为他觉得这个角色和自己很像，都是“傻傻的”。
电视版中的采臣除了重情重义外，还有一身好武功，剧中有不少高吊钢丝飞来飞去的打戏，让晓东颇为头疼。原来他一直都有恐高症，早前拍片时又曾试过在３０层楼高的地方倒吊，现在有点“谈钢丝色变”。不过戏里有他和大Ｓ在石林上飞来飞去的镜头，到时女孩子都上去了他怎么办？陈晓东皱皱眉：“那我肯定也只好硬着头皮上了！”司马红叶（宣萱饰）司马红叶是剧中新增加的角色，她是燕赤霞和司马三娘之女，跟父母一起除妖，是剧中武艺最高的角色。但实际上宣萱本人的武功底子最差，想到不久要吊钢丝拍打戏，宣萱就信心不足：“实在不行，只好靠替身了！”不过让她得意的是，剧中她的感情戏最多，不但与吴京扮演的诸葛流云是一对欢喜冤家，而且和陈晓东扮演的宁采臣还有一段“剪不断”的感情纠葛，和大Ｓ更是“不共戴天”的情敌！“总之她爱上了不该爱的人，同时又被不该爱的人爱上，最后为她爱的人去死，结局挺惨的。”宣萱说。
角色曝光聂小倩（大Ｓ饰第一次拍古装剧，大Ｓ坦言压力不小。巧的是，当年饰演聂小倩的王祖贤也是个新人。该剧制作人杨登魁说，用大Ｓ演聂小倩主要也就是看中她的“新鲜劲”，而且天生一双“电”眼，极具“狐媚相”
！大Ｓ说自己小时候就常和妹妹一起看电影《倩女幽魂》，爱死了里面长发飘飘的王祖贤。而这次她最满意的就是自己在剧中的扮相，因为她由女鬼变成了一个狐仙，所以她每件衣服都很“清凉”，最保守的也是半露香肩；最妙的是还会在头发上插一个白色的小狐狸发饰，以点明她的身份。剧中聂小倩与电影版的另一个很大不同是性格更加活泼，喜欢多管闲事。